Мдв это: МДВ — это… Что такое МДВ?

Содержание

МДВ — это… Что такое МДВ?

МДВ — Медицина для вас (газета) механизм дальнего взведения … Словарь сокращений русского языка

СПб-МДв — СПМД Санкт Петербургский монетный двор ранее: ЛМД http://www.mintspb.ru/ Санкт Петербург СПб МДв Источник: http://ruscoins.narod.ru/bio ch sch.html … Словарь сокращений и аббревиатур

Битвы Fantasy — Битвы Fantasy самая масштабная и известная настольная игра от компании «Технолог». Наборы включают один или несколько отрядов, реально стреляющие оружия, которые нужно собрать самим. Иногда попадаются строительные наборы. Для игры… … Википедия

FSO (технология) — У этого термина существуют и другие значения, см. FSO. FSO Free Space Optics (WO Wireless Optics, АОЛС Атмосферная Оптическая Линия Связи) вид оптической связи, использующий электромагнитные волны оптического диапазона (свет), передаваемые через… … Википедия

СПМД

— СПб МДв СПМД Санкт Петербургский монетный двор ранее: ЛМД http://www.mintspb.ru/ Санкт Петербург СПб МДв Источник: http://ruscoins.narod.ru/bio ch sch.html СПМД Союз правой молодёжи Донбасса У … Словарь сокращений и аббревиатур

Коронас-Фотон — Коронас Фотон … Википедия

Баев, Олег Яковлевич — У этого термина существуют и другие значения, см. Баев. Баев, Олег Яковлевич Дата рождения: 28 июня 1941(1941 06 28) (71 год) Место рождения: Воронеж, РСФСР Страна … Википедия

Коронас-фотон — КА «Коронас Фотон» Основные сведения: Дата и время запуска: 30 января 2009 года, 16:30 МДВ Платформа: Метеор М Заказчики: Федеральное кос … Википедия

Олег Баев — Баев, Олег Яковлевич Дата рождения: 28 июня 1941 Место рождения: Воронеж, РСФСР Гражданство: СССР, РФ Научная сфера: Криминалистика Место … Википедия

Олег Яковлевич Баев

— Баев, Олег Яковлевич Дата рождения: 28 июня 1941 Место рождения: Воронеж, РСФСР Гражданство: СССР, РФ Научная сфера: Криминалистика Место … Википедия

Основные свойства МДФ плит

МДФ плита расшифровывается как мелко дисперсионная фракция, материал для выделывания плит из древесных волокон средней плотности (также её называют ДВП средней плотности), спрессованных под высоким давлением. Данные плиты являются основным материалом для производства предметов мебели и внутренней отделки помещений -декоративных молдингов, стеновых панелей и т. д. Производство плит МДФ было начато в Южной Америке в начале 1960-х годов.

Название МДФ происходит от целевой плотности древесноволокнистых плит, которая колеблется от 1100 кг / м³ до 3600 кг / м³, плита получается твердой и однородной, благодаря чему она получает много положительных свойств, особенно используемых при изготовлении мебели.

Стоит отметить, что субъективная плотность доски зависит от плотности волокон, которые были использованы для ее изготовления. Толстый МДФ с плотностью выше 4000 кг / м³ уже может считаться HDF (High Density Fiberboard) — ХДФ на русском – дословно переводится древесная плита высокой плотности.

Преимущества

МДФ — это не что иное, как древесная плита, изготовленная из смеси древесного сырья и органических соединений. Такая смесь обрабатывается и прессуется при очень высоких температурах и давлении, поэтому эти плиты идеальны для производства мебели.

Рассмотрим многочисленные плюсы

MDF отлично подходит для производства мебели, включая кухонную мебель, главным образом благодаря ее многочисленным преимуществам:

Долговечность — чрезвычайно важная особенность мебельного сырья, поскольку она определяет, как долго вам прослужат кухонные шкафы и другая мебель.
Легкая обработка — специфика МДФ позволяет легко обрабатывать плиты: их без труда можно обрезать до необходимых размеров, фрезеровать и даже гнуть, что часто используется при изготовлении мебельных углов – например гнутые фасады на кухне.

Легко держать в чистоте – особенно важно в такой требовательной к чистоте комнате, как кухня. МДФ имеет гладкую поверхность, благодаря которой легко очищается с использованием общедоступных моющих средств.
Окрашенные плиты МДФ устойчивы к различным пятнам или химическим веществам, поэтому данный материал успешно используют в изготовлении кухонной мебели.
Бесчисленные доступные цвета, узоры и отделки означают, что каждый найдет что-то подходящее для своей кухни. Возможность отделки в матовой, полуматовой или полноцветной версии позволяет легко адаптировать любые фасады к стилю кухни.
Привлекательная цена по сравнению с обычной древесиной делает MDF доступным для всех.

Небольшие недостатки МДФ

Как у любого материала, здесь не обойтись без недостатков:

Низкая устойчивость к влаге при отсутствии надлежащей защиты плиты — если кромки не защищены металлической или акриловой полосой, они быстро поглощают влагу, что приведет к их разбуханию и деформации.

Восприимчивость к царапинам – это особенно видно при использовании лакированных фасадов, поэтому не рекомендуется чистить их абразивными ингредиентами.
Иногда подвергается сильному и долговременному воздействию водяного пара и жира и как следствия панели МДФ могут быть запятнаны или слегка обесцвечены при длительном воздействии, например на протяжении многих лет.

Состав МДФ плиты и её изготовление

Для изготовления плит МДФ используют натуральные компоненты, в состав плит входит следующее:

Измельченная древесная фракция;
И связующий компонент, в качестве которого используется лигнин, его также называют «природный клей», поэтому данные плиты можно назвать полностью экологичными.

Изготовление плитного материала – это сложный процесс обработки, на первоначальном этапе, это обработка древесины путем её измельчения до необходимой фракции, на следующем этапе – под воздействием высокого давления и определенного температурного режима идет прессовка компонентов в плиту, в результате чего плита приобретает твёрдую структуру.

Благодаря компонентам, нужному давлению и температурному режиму, полученная плита по многим параметрам превосходит первоначальное сырьё из которого изготавливается, так как плотность натурального дерева значительно ниже, чем прессованной панели.

Уход за мебелью из МДФ

Фасады из МДФ характеризуются очень широким спектром цветов и относительно высокой устойчивостью к механическим повреждениям, УФ-излучению, что гарантирует долговечность цветов в течение длительного времени. Яркие глянцевые фасады из МДФ более восприимчивы к царапинам, чем матовые и они требуют правильного использования и ухода.

Следует обратить внимание на то, что фасады из MDF предназначены для использования в закрытых помещениях с нормальной температурой и влажностью воздуха.

Очистка и техническое обслуживание

Для очистки фасадов МДФ используйте только мягкие, мягкие хлопчатобумажные, шелковые или микроволокнистые ткани.
Большинство типичных пятен можно удалить сухой или влажной тканью.
Вы можете использовать средства для мытья посуды, очиститель для окон, очищающее гели, главное это должны быть не абразивные вещества, в результате использования которых могут образоваться царапины.
Всегда после использования химических веществ очищайте переднюю поверхность чистой водой и вытрите ее насухо.
Если вы испачкали поверхность красящими веществами, удалите данные вещества тканью как можно скорее, чтобы избежать изменение цвета мебели.

Что следует избегать

Для МДФ не желательно длительно воздействие водой и паром.
Приготовление пищи без использования вытяжки, так как жидкость и жир будут негативно воздействовать на МДФ.
Оставлять пятна жидкостей и жира, так как они могут привести к обесцвечиванию поверхности.

Использование щетки с жесткой щетиной, металлическими губками, а также сильными абразивами и отбеливателями.
Использование ацетона для очистки.
Растворители, абразивы с абразивными свойствами (порошки, кремы), неразбавленные или концентрированные чистящие средства.
Погружение элементов МДФ в воду не допускается.

В заключение

Как мы видим, МДФ достаточно хороший материал для изготовления мебели, в том числе и кухонной, но, как и любой другой материал требует ухода и правильной эксплуатации. Если соблюдать все правила, то мебель прослужит вам и вашей семье ни одно десятилетие.

что это такое, особенности, производство и применение

Что такое МДФ

МДФ – один из наиболее востребованных материалов для производства мебели. Но несмотря на то, что это название у всех на слуху, мало кто понимает, что означает аббревиатура и какими свойствами обладает сам материал. Итак, предлагаем разобраться, что же такое МДФ и почему он так востребован?

МДФ плиты фото

Аббревиатура МДФ это калька от английской фразы Medium Density Fiberboard (MDF), то есть «среднеплотная древесноволокнистая плита».

Техника производства МДФ

Для изготовления МДФ используются просушенные волокна древесины. Они обрабатываются связующим синтетическим веществом, в основе которых лежат модифицированные при помощи меламина карбидные смолы. Поскольку эмиссия формальдегида сохраняется на низком уровне, таком же, как и у натурального дерева, что позволяет минимизировать выделение веществ, опасных для здоровья. После обработки из волокон формируется прямоугольный утолщенный ковер, поддающийся горячему прессованию и шлифовке.

Технология изготовления МДФ является усовершенствованной технологией производства ДВП.

Особенности МДФ

МДФ широко применяется в промышленности и строительстве. Высокая востребованность этого материала объясняется особенностями его физических свойств.

Высокая механическая прочность. По своей прочности и устойчивости к механическим воздействиям плиты МДФ превосходит множество других материалов, а потому активно используется в строительстве и для производства мебели. МДФ отлично фиксирует фурнитуру и мебельные крепежи.
Устойчивость к воздействию влаги и горячего пара. По этой характеристике МДФ прямо конкурирует с ДСП.
Возможность обрабатывать пильными, шлифовальными, фрезеровальными инструментами. Это позволяет вырезать из плит МДФ замысловатые фигурные изделия, не затрачивая много усилий на обработку материала.
Экологическая безопасность. Поскольку МДФ-плиты обладают влагоотталкивающими свойствами, они не поддаются воздействию микроорганизмов, а потому не плесневеют и не покрываются грибком.

Для примера приведем фото фасадов кухонь. На первом фото фасады из МДФ с пленкой, на втором фасады МДФ с эмалью:

Где применяется МДФ

Технологические свойства плит МДФ сделали этот материал невероятно распространенным, особенно в сфере производства мебели. Плиты используются для изготовления резных фасадов, а фасады, опресованные в пленку ПВХ, по своим характеристикам не уступают мебели из натурального дерева. МДФ используются для создания множества изделий:

Напольные покрытия. Ламинированные полы из МДВ-плит смотрятся стильно и служат долго благодаря влагоустойчивости и прочности.
Стеновые панели. Экономичный и практичный вариант, идеально подходящий для отделки квартиры, дома, офиса.
Межкомнатные двери. Двери из МДФ легко поддаются обработке, а потому характеризуются разнообразием дизайнерских решений.
Декоративные элементы, карнизы, рамочные профили, наличники.
Электроника. МДФ применяется в производстве акустических систем для декора корпуса, а также для производства упаковки.

Вывод: если вам нужны изделия, которые не уступают натуральному дереву или ДСП, выбирайте МДФ. Он подходит по всем параметрам, отлично смотрится и долго служит.

В статье использованы материалы с сайта mebel.ru. Подробнее — http://www.mebel.ru/blog/mdf-ili-dsp-chto-luchshe/

Панели МДФ — что это, характеристики и применение

МДФ панель – это обработанные и подготовленные к использованию листы, произведенные из МДФ. Этот строительный материал используется в большом количестве работ и является одним из самых популярных материалов. Рассмотрим подробнее непосредственно материал МДФ, а также вид панелей, используемых в современном строительстве.

Итак, МДФ панели что это такое? МДФ расшифровывается как мелко-дисперсионная фракция, и является древесноволокнистой плитой средней плотности. МДФ производят из опилок и волокон дерева, которые склеиваются между собой при помощи клеящих материалов, а также подвергаются прессованию и термообработке. Таким образом. МДФ является ни чем иным, как деревоплитой, произведенной из самых мелких компонентов. В отличие от других видов деревоплиты. МДФ обладает многими улучшенными свойствами и является самым часто используемым материалом.

Из полезных свойств МДФ можно выделить следующие:

средняя плотность, которая делает материал более прочным, но в то же время более мягким и эластичным, что позволяет ему использоваться дольше, а также поддается большому количеству видов обработки;
отличная теплостойкость, позволяющая использовать его в качестве утеплителя или как элемент для утепления при использовании других материалов в комплексе;
стойкость к грибкам и микроорганизмам, а также экологичность;
относительная дешевизна ввиду того, что МДФ вырабатывается из вторичного сырья.

Применение МДФ очень обширное. Например, некоторые МДФ-материалы используются для изготовления мебели, а также для косметической и тепловой отделки помещений. И здесь как раз особую роль играют МДФ-панели.

МДФ-панель – это лист МДФ, который имеет определенную длину, ширину и толщину, и подготовленный специальным образом. Так, МДФ панель делают толщиной примерно в пять или шесть миллиметров, и с обоих сторон делают стыки, позволяющие делать конструкцию или более плотно совмещать панели между собой. Также, одна из сторон МДФ чаще всего окрашена.

МДФ-панели бывают нескольких видов и подойдут, в зависимости от вида, как для наружных, так и для внутренних работ. Так, для внутреннего утепления помещений используют МДФ-панели, которые совмещают между собой, делая второстепенный слой для стены, а в пространство между панелями и стеной помещают стекловату или другой материал для помещения.

Внутренние помещения, отделанные МДФ-панелями, смотрятся очень современно и экологично.

Строительные материалы на основе МДФ стали производить еще в шестидесятых годах прошлого столетия, но только последние двадцать лет они стали действительно известными и востребованными. В Европе МДФ считается материалом номер один, и в России большая часть отделочных работ производится именно при использовании этого материала.

что это: характеристики, описание, свойства

Каждый в своей жизни слышал, а может даже и использовал плиты МДФ. Но что такое МДФ? Знаете ли вы, как расшифровываются эти три буквы?

Сокращение МДФ образована от английского словосочетания Medium Destiny Fiberboard, что в переводе означает «среднеплотная древесноволокнистая плита». В русском использовании слова также допускают расшифровку — мелкодисперсионная фракция.

Плиты МДФ представляют собой прессованную «муку» древесных пород под воздействием большого давления и высоких температур. Для более плотного соединения стружки между собой используют карбидные смолы, модифицированные меланином, а также натуральные — лигнин и парафин.

Древесноволокнистые плиты имеют много функциональных свойств. Они имеют высокую прочность от механических повреждений, устойчивость к влажности, водоотталкивающие свойства и износостойкость. Все перечисленные характеристики позволяют находить плитам широкое применение, как в производстве, так и повседневной жизни.

МДФ в основном используют в мебельном производстве ввиду износо- и влагостойкости. Также благодаря износоустойчивости, плиты широко применяют для ламинированных напольных покрытиях. Из них делают и акустические системы.

Помимо всех уникальных свойств, МДФ представляет собой высокотехнологичный материал. Он лёгок в обработке, благодаря чему деталям, изготовленным из него, можно придавать любую форму. На этот материал легко наносить краску, лак и эмали. Также его ламинируют, кашируют и придают формовке. При желании не составит труда покрыть его пластиком или пленкой.

Изделия из МДФ выгоднее в ценовой политике практически в 2 раза и также экологически чистые как древесные породы.

Популярность данного материала в мебельном производстве легко объяснима. Во-первых, экологичность продукта, изготовленного из природных материалов, и невосприимчивость к разным грибкам. Во-вторых, более низкая стоимость по сравнению с древесиной, что позволяет производить продукцию в крупных масштабах для огромного числа покупателей. В-третьих, как было сказано выше, легкость обработки и возможность придать любую причудливую форму под любой покрытие. В-четвертых, влагостойкость и механическая прочность. И на все эти преимущества имеется лишь один минус- допустимая безопасная температура для него 70 градусов Цельсия.

Таким образом, можно сделать вывод: плиты МДФ универсальны. Они подойдут почти для любых бытовых нужд. Экологичность, прочность, влагостойкость обеспечат долгий срок службы изделия. Теперь можно с легкость ответить на вопрос: что такое МДФ? Это универсальный материал, превосходящий в некоторых аспектах даже древесину, однако стоит беречь его от высоких температур.

Кондиционеры MDV — модели, цены, описания

MDV — оригинальный бренд корпорации Midea Holding Co., Ltd., под которым выпускаются системы кондиционирования воздуха различного класса, типа и назначения. На протяжении последнего десятилетия марка MDV удерживает высокие позиции в рейтинге потребительских предпочтений, оставаясь одним из самых успешных брендов корпорации-производителя.

Своим успехом бренд обязан более чем 40-летнему опыту работы корпорации Midea Holding Co., Ltd., которая сегодня по качеству изделий и объемам производства входит в десятку признанных мировых лидеров в области климатики. Продукция корпорации, чья штаб-квартира расположена в г. Шунде, провинция Гуандун, Китай, экспортируется в более чем 120 стран мира.

Начало истории бренда MDV было положено в 1985 году, когда Midea Holding Co., Ltd., открыла подразделение, занимающееся исключительно производством кондиционеров. Через 8 лет был разработан бренд MD, — прототип MDV. В это же время началось технологическое сотрудничество Midea Holding Co., Ltd. с компанией Toshiba. В 1998 году было создано совместное предприятие по производству компрессоров. Вскоре компания прошла все необходимые тесты и стала обладателем сертификата ISO14001 Комитета по сертификации качества. Кроме того, Midea Holding Co., Ltd. стала одной из первых компаний в Китае, которая получила международный сертификат ISO9001 Комитета по сертификации качества. Ей также принадлежат сертификаты CE, CSA, SAA, РосТест и другие.

В 1999 году Midea Holding Co., Ltd. провела реорганизацию, результатом которой было создание самостоятельного подразделения Midea Aircon, отвечающего за производство систем кондиционирования. В этом году был создан бренд MDV. Под этой торговой маркой компания начала экспортировать, главным образом, полупромышленное оборудование, системы чиллер-фанкойл и мультизональные VRF-системы, т.е. традиционно наиболее высокотехнологичную продукцию.
В 2001 году руководством компании принято решение о включении в линейку MDV модельного ряда бытовых кондиционеров. В настоящее время модельный ряд MDV включает в себя полную номенклатуру оборудования — от сплит-систем бытового назначения до промышленных чиллеров.

В 2002 году Midea Aircon получила сертификат ISO18001, являющийся подтверждением того, что при производстве компания использует не менее 60% собственных разработок.

В 2011 году Midea Holding Co., Ltd. возглавляет «большую китайскую тройку» компаний по производству систем кондиционирования, причем лидирует с большим отрывом. Климатическая техника MDV может соперничать с любым аналогичным оборудованием самых известных мировых производителей, в первую очередь, благодаря уникальной по своей завершённости цепочке производства, одной из самых совершенных в мире. Midea Holding Co., Ltd. имеет отделения по производству электроники, компрессоров и двигателей для кондиционеров, а также свой собственный дизайнерский центр.

Планы достижения лидерства в производстве кондиционеров подкрепляются наличием значительных производственных мощностей. Общая площадь производственных помещений компании — более 1015000 м2, на которых размещено 108 производственных линий. Годовой оборот за 2010 год составил 16 миллиардов долларов США.

Стремясь к развитию MDV как передового бренда на климатическом рынке, Midea Holding Co., Ltd поставляет в Россию широкий модельный ряд высокотехнологичных и энергоэффективных систем кондиционирования бытовой, полупромышленной и промышленной серий.

MDV -Бренды

MDV – профессиональный климатический бренд, принадлежащий корпорации Midea Group Co., Ltd., являющейся сегодня одним из самых известных в мире производителей бытовой техники (кондиционеры, стиральные машины, холодильники, микроволновые печи и пр.). Это транснациональная корпорация с современными производственными площадками в Китае, Египте, Вьетнаме, Индии, Бразилии, Белоруссии.

Штаб-квартира компании располагается в городе Шунде (провинция Гуандун, Китай). Годовой оборот – свыше 22 млрд. долларов, штат – 150 тыс. сотрудников по всему миру, из них 3 тыс. – высококлассные инженеры.

Благодаря высокому качеству продукции, высокой культуре производства, а также постоянно внедряемым инновациям, известнейшие международные концерны размещают производство своей продукции на заводах Midea под собственными торговыми марками.

В компании внедрена уникальная по своей завершённости цепочка производства. Это означает, что более 80% всех компонентов, используемых в производстве, изготавливается на собственных предприятиях. Качество компонентов заслужило высокое доверие остальных производителей, выпускающих технику, в том числе, и под различными японскими брендами, с использованием компонентов, произведённых на заводах Midea.

Одной из стратегических целей корпорации является повышение известности и укрепление позиций собственных (оригинальных) специализированных торговых марок, таких как MDV.

Бренд MDV создан на базе Дивизиона коммерческого климатического оборудования CAC корпорации Midea Group Co., Ltd. в 1999 г. В ассортиментный портфель MDV изначально входило только сложное высокотехнологичное оборудование для индустриального охлаждения: прежде всего, мультизональные системы кондиционирования с переменным током хладагента (VRF-системы), чиллеры и фанкойлы, компрессорно-конденсаторные блоки, полупромышленные системы, используемые в коммерческом сегменте. В 2001 г. модельную линейку пополнили бытовые сплит-системы.

MDV – это надежное и функциональное климатическое оборудование. В бытовых кондиционерах MDV используются технологии, применяемые в климатическом оборудовании для индустриального охлаждения (например, высококачественные электронные компоненты американской компании International Rectifier). Благодаря этому системы MDV превосходят аналоги по целому ряду показателей: надежность, высокая эффективность, низкий уровень шума, полезные функции и режимы.

MDV воплощает опыт, лучшие идеи и научно-технические достижения, которые производитель накопил за несколько десятилетий своей работы. Это бренд, созданный специально для экспорта и поступающий на рынки зарубежных стран исключительно через специализированные климатические компании.

Сегодня кондиционеры MDV экспортируются в более чем 120 стран, в том числе, и в Россию.

Эксклюзивный дистрибьютор климатических систем MDV в РФ – группа компаний «АЯК». Сайт www.mdv-russia.ru

Ген pp38 вируса болезни Марека (MDV) необходим для цитолитической инфекции В-клеток и поддержания трансформированного состояния, но не для цитолитической инфекции эпителия перьевого фолликула и горизонтального распространения MDV

Резюме

Вирус болезни Марека имеет уникальный фосфопротеин, pp38, который, как предполагается, играет важную роль в патогенезе болезни Марека. Целью настоящего исследования было использовать мутантный вирус, лишенный гена pp38 (rMd5Δpp38), чтобы лучше охарактеризовать биологическую функцию pp38.Эта работа показывает, что ген pp38 необходим для установления цитолитической инфекции в В-клетках, но не в эпителии перьевых фолликулов, для выработки адекватного уровня латентно инфицированных Т-клеток и для поддержания трансформированного статуса in vivo.

Биологическая функция уникального гена pp38 вируса болезни Марека (MD) (MDV) в патогенезе MD изучена недостаточно. pp38 был связан с лимфоидным тропизмом (18), реактивацией после латентного периода (19, 21), поддержанием опухолей (20) и иммуносупрессией (8).Три рекомбинантных вируса (rMd5, rMd5Δpp38 и rMd5 / pp38CVI) были использованы в этой работе, чтобы расширить предыдущие знания о роли pp38 в вирусной репликации и передаче, трансформации и вирусной регуляции апоптоза, латентности, реактивации и регуляции клеточного цикла. Конструирование рекомбинантных вирусов rMd5 и rMd5Δpp38 было описано ранее (15). Конструирование rMd5 / pp38CVI описано в другом месте (L. F. Lee, X. Cai, I. M. Gimeno и S. M. Reddy, представлены для публикации).Вкратце, процедура расщепления рестрикционной эндонуклеазой с помощью RecA была использована для вставки гена pp38 из CVI988 / Rispens в тот же сайт, который ранее содержал ген pp38 Md5, и вставка гена pp38 в правильный сайт позже была подтверждена с помощью ПЦР и ДНК. последовательность действий. Экспрессия pp38 in vitro и in vivo в rMd5 / pp38CVI была подтверждена иммуноокрашиванием моноклональным антителом Т65 (L. F. Lee, неопубликованные данные), которое специфически реагирует с CVI988 / Rispens pp38.

Для изучения репликации и передачи однодневных цыплят 15×7 (4) инокулировали rMd5, rMd5Δpp38 или rMd5 / pp38CVI.Горизонтальную передачу вируса контролировали с использованием контактных цыплят. Образцы сумки, тимуса и селезенки собирали через 3, 6 и 9 дней после инокуляции (dpi). При разрешении 26 точек на дюйм были собраны образцы эпителия перьевых фолликулов (FFE) и селезенки контактных кур. Моноклональные антитела 1AN86.17 и T81 (17), специфичные к гликопротеину B (gB) MDV и рибонуклеотидредуктазе (RR), соответственно, были использованы для изучения репликации MDV. При 6 dpi экспрессия позднего антигена gB и раннего антигена RR не могла быть обнаружена в сумке Фабрициуса, тимусе или селезенке после инокуляции rMd5Δpp38 (рис.), но оба вирусных антигена были высоко экспрессированы у всех протестированных цыплят после инокуляции rMd5 или rMd5 / pp38CVI (рис.). Неспособность rMd5Δpp38 вызывать цитолитическую инфекцию была специфичной для клеточного типа, поскольку поражались В-лимфоциты, но не FFE (фиг.). Горизонтальную передачу вируса подтверждали путем выделения MDV от каждой контактной курицы (данные не показаны).

Экспрессия RR и gB в различных тканях. (А) Экспрессия RR в сумке Фабрициуса через 6 дней после инокуляции rMd5Δpp38.(B) Экспрессия gB в FFE через 26 дней после инокуляции rMd5Δpp38. (C) Экспрессия RR в сумке Фабрициуса через 6 дней после инокуляции rMd5. (D) Экспрессия gB в FFE через 26 дней после инокуляции rMd5. (E) Экспрессия RR в сумке Фабрициуса через 6 дней после инокуляции rMd5 / pp38CVI. (F) Экспрессия gB в FFE через 26 дней после инокуляции rMd5 / pp38CVI. Масштаб каждого изображения представлен в микрометрах полосой в правом нижнем углу каждой панели.

Для изучения влияния гена pp38 на трансформацию и апоптоз было проведено два эксперимента.В эксперименте 1 однодневных цыплят 15×7 (4) инокулировали либо rMd5, либо rMd5Δpp38. Половину животных в каждой экспериментальной группе умерщвляли через 6 недель после инокуляции (wpi), а другую половину умерщвляли при 15 wpi. Образцы блуждающего нерва, плечевого и седалищного нервов, гонад, легких, печени и селезенки были собраны для гистопатологии и иммуногистохимии, а также для анализа опосредованного дезоксинуклеотидилтрансферазой определения ника-конца dUTP-биотина (TUNEL). Эксперимент 2 был проведен для подтверждения того, что различия между rMd5Δpp38 и rMd5 обусловлены исключительно делецией pp38.План эксперимента был таким же, как и для реплики 1, но включал цыплят, инокулированных rMd5 / pp38CVI.

Частота грубых повреждений, индуцированных rMd5Δpp38 и rMd5, оценивалась при 6 и 15 wpi в реплике 1 (таблица). rMd5 индуцировал высокую частоту лимфопролиферативных поражений при 6 wpi (от 60 до 80%), которая имела тенденцию к увеличению при 15 wpi (до 100%). rMd5Δpp38 индуцировал микроскопические лимфопролиферативные поражения только у 25% цыплят при 6 wpi. Частота поражений, вызванных rMd5Δpp38, также имела тенденцию к увеличению при 15 wpi (до 44%), но была значительно ниже ( P <0.05), чем в группе, инокулированной rMd5. Большинство лимфопролиферативных поражений, вызванных rMd5Δpp38, не прогрессировали до крупных опухолей. Это контрастировало с лимфопролиферативными поражениями, вызванными rMd5, которые при 6 и 15 wpi были очевидными макроскопическими и гистологическими поражениями. Никаких различий в частоте лимфопролиферативных поражений между rMd5 / pp38CVI и rMd5 не было обнаружено ни при 6, ни при 15 wpi в повторении 2 (таблица). Фенотип трансформированных клеток в опухолях, индуцированных rMd5, rMd5 / pp38CVI и rMd5Δpp38, во всех случаях был CD4 ⁺ CD8 ^— Meq ⁺ MATSA ⁺ (6, 11, 12; данные не представлены).В лимфопролиферативных поражениях, вызванных rMd5Δpp38, которые можно было обнаружить только при микроскопическом исследовании, многие клетки имели гомогенно конденсированный хроматин, и можно было обнаружить многочисленные апоптотические тельца (рис.). Фрагментация ДНК подтверждена методом TUNEL (рис.). Лимфопролиферативные поражения, индуцированные либо rMd5, либо rMd5 / pp38CVI, не демонстрировали морфологических признаков апоптоза (рис.), А фрагментация ДНК не могла быть обнаружена с помощью анализа TUNEL (рис.). Многие вирусы разработали различные механизмы для блокирования апоптоза (1-3, 5, 7, 10, 14).Это исследование показывает, что pp38 участвует в блокировании апоптоза, и это может, по крайней мере, частично объяснить неспособность лимфопролиферативных поражений прогрессировать до крупных опухолей. Однако неясно, блокирует ли pp38 напрямую апоптоз или мешает цитотоксическому ответу Т-лимфоцитов против опухолей MD.

Лимфопролиферативные поражения внутренних органов и нервов. (A) Окрашенный гематоксилином и эозином (H&E) участок почек цыпленка, инокулированного rMd5. (B) H & E-окрашенный срез яичника цыпленка, инокулированного rMd5Δpp38.(C) H & E-окрашенный срез яичника цыпленка, инокулированного rMd5 / pp38CVI. (D) Анализ TUNEL в срезе легких цыпленка, инокулированного rMd5. (E) Анализ TUNEL в срезе легких цыпленка, инокулированного rMd5Δpp38. (F) Анализ TUNEL в срезе легких цыпленка, инокулированного rMd5 / pp38CVI. (G) H & E-окрашенный срез нерва цыпленка, инокулированного rMd5. (H) H & E-окрашенный срез нерва цыпленка, инокулированного rMd5Δpp38. (I) H & E-окрашенный срез нерва цыпленка, инокулированного rMd5 / pp38CVI. Масштаб каждого изображения представлен в микрометрах полосой в правом нижнем углу каждой панели.

ТАБЛИЦА 1.

Частота поражений при 6 и 15 wpi ^a

Реплика	Инокулят	Цыплята (%) с указанным типом поражений в:
		6 точек на дюйм				15 точек на дюйм
		Висцеральный		Нерв		Висцеральный		Нерв
		Валовый	Гистологический	Валовой	Гистологический	Валовой	Гистологический	Валовой	Гистологический
1	rMd5Δpp38	0a	25ab	0a	0a	0a	6a	44b	25ab	37a
	rMd5	60b	60b	73b	80b	79b	100a	100b	100b
91
91 Управление	0a	0a	0a	0a	0a	0c	0a	0c
2	rMd5Δpp38	0a	20ab	0a	ab 0a	60a	8a	40ab
	rMd5	43b	80b	86b	100b	60b	100b	100b	100b
	rMd5 / pp38CVI	35b	80b	76b	80b					100b	100b
	Контроль	0a	0a	0a	0a	0a	0a	0a	0a

Поражения нервов, вызванные rMD индуцированный rMd5.В то время как rMd5 и rMd5 / pp38CVI индуцировали типичные неопластические поражения (тип A) (рис.), RMd5Δpp38 вызывал более воспалительные поражения (тип B), характеризующиеся обильным отеком и обширной инфильтрацией плазматических клеток (рис.). Обычно считается, что поражения типа B имеют важный аутоиммунный компонент (13). Наши результаты предоставляют дополнительные доказательства важности pp38 в регуляции иммунного ответа и предполагают необходимость дальнейших исследований.

Для изучения роли pp38 в латентном периоде, реактивации и клеточном цикле однодневных цыплят 15×7 (4) инокулировали либо rMd5, либо rMd5Δpp38.Селезенки собирали с разрешением 3, 6, 14 и 26 точек на дюйм для изучения распределения спленоцитов в различных фазах клеточного цикла путем окрашивания йодидом пропидия и последующего анализа проточной цитометрии. Мы обнаружили, что инфицирование rMd5 или rMd5Δpp38 увеличивало процент спленоцитов в S-фазе уже на 3 dpi, но никакой разницы между двумя вирусами не было обнаружено (таблица). По нашим результатам невозможно определить, регулирует ли MDV клеточный цикл или есть ли изменение в популяциях клеток селезенки после заражения MDV.Были собраны семь дополнительных селезенок с разрешением 14 точек на дюйм для выделения с помощью анализов бляшек и ПЦР в реальном времени (9). Стандартный анализ бляшек был хорошим индикатором способности латентных MDV реактивироваться в культуре клеток, в то время как ПЦР в реальном времени является относительной мерой количества копий вирусного генома в образце. Наши результаты показывают, что, несмотря на меньшее количество латентно инфицированных Т-клеток у цыплят, инокулированных rMd5Δpp38 (в 10 раз меньше), способность вируса к реактивации с латентного периода в культуре клеток не пострадала (т.е.е., в 10 раз меньше реактивации, но также относительно в 10 раз меньше копий вирусного генома). Таким образом, наши результаты не подтверждают роль pp38 в реактивации (16), поскольку не было обнаружено различий между rMd5 и rMd5Δpp38 в способности реактивироваться с латентного периода.

ТАБЛИЦА 2.

Процент спленоцитов на разных стадиях клеточного цикла после инфицирования rMd5 и rMd5 Δpp38 ^a

9190 149

Число dpi	Группа	Спленоцитов (%) на указанной стадии ^b
Число dpi	Группа	G ₀ / G ₁	S	G ₂ / M
3	rMd5Δpp38	61.30a	19.84b	17.95a
	rMd5	72.49a	13.21ab	13.42b
	Control	74.72a	4.33a	20.10a
6	rMd5Δpp38	69.97a	5.06a	24.20a
	rMd5	71.45a	7.21b	20.14b
	Control	71.17a	3.94a	24.37a
14	rMd5Δpp38	80.58a	3.11a	15.37a
	rMd5	78.34a	5.00b
	Control	77.42a	3.15a	16.65a
26	rMd5Δpp38	76.09b	5.22b	14.98ab
	rMd5	73.88b	7.08c	13.71b
	Control	79.41a	2.88a	16.71a

В заключение, наши результаты показывают, что pp38 необходим для установления цитолитической инфекции в B-лимфоцитах но не в FFE, чтобы продуцировать адекватный уровень латентно инфицированных Т-клеток и поддерживать трансформированный статус лимфоцитов путем предотвращения апоптоза. В этой работе делеция pp38 приводит к раннему началу повреждений нервов B-типа и указывает на то, что pp38 может участвовать в иммуномодуляции иммунного ответа против MD.Взятые вместе, эти результаты показывают, что rMd5Δpp38 может иметь потенциал использования в качестве модели для изучения регрессии опухолей и иммунного ответа против опухолей, индуцированных MDV и MDV.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Афонсу, К. Л., Дж. Г. Нейлан, Г. Ф. Кутиш и Д. Л. Рок. 1996. Гомолог вируса африканской чумы свиней Bcl-2, 5-HL, подавляет апоптотическую гибель клеток. J. Virol. 70 : 4858-4863. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 2. Афонсу, К. Л., Э. Р.Тулман, З. Лу, Л. Жак, Г. Ф. Кутиш, Д. Л. Рок. 2000. Геном вируса оспы птиц. J. Virol. 74 : 3815-3831. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 3. Афонсу, К. Л., Э. Р. Тулман, З. Лу, Л. Жак, Д. Л. Рок и Г. Ф. Кутиш. 2001. Геном вируса герпеса индейки. J. Virol. 75 : 971-978. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Бэкон, Л. Д., Х. Д. Хант и Х. Х. Ченг. 2000. Обзор развития линий курицы для разрешения генов, определяющих устойчивость к болезням.Пульт. Sci. 79 : 1082-1093. [PubMed] [Google Scholar] 5. Брун А., К. Ривас, М. Эстебан, Дж. М. Эскрибано и К. Алонсо. 1996. Ген вируса африканской чумы свиней A179L, вирусный гомолог bcl-2, защищает клетки от запрограммированной гибели клеток. Вирусология 225 : 227-230. [PubMed] [Google Scholar] 6. Чан, М. Л., К. Л. Чен, Л. Л. Агер и М. Д. Купер. 1988. Идентификация птичьих гомологов антигенов CD4 и CD8 млекопитающих. J. Immunol. 140 : 2133-2138.[PubMed] [Google Scholar] 7. Cleary, M. L., S. D. Smith, and J. Sklar. 1986. Клонирование и структурный анализ кДНК из bcl-2 и гибридного транскрипта bcl-2 / иммуноглобулина, полученного в результате транслокации t (14; 18). Ячейка 47 : 19-28. [PubMed] [Google Scholar]

8. Цуй, З. З. и А. Цинь. 1996. Иммунодепрессивные эффекты рекомбинантного фосфорилированного белка 38 кДа вируса болезни Марека, p. 278-283. В Р. Ф. Сильва, Х. Х. Ченг, П. М. Кусенс, Л.Ф. Ли и Л. Ф. Велисер (ред.), Текущие исследования болезни Марека. Американская ассоциация патологов птиц, Inc., Kennett Square, Pa.

9. Gimeno, I.M., R.L. Witter, H.D. Hunt, S.M. Reddy и W.M. Reed. 2004. Биохарактеристики, общие для высокозащитных вакцин против болезни Марека. Avian Pathol. 33 : 59-68. [PubMed] [Google Scholar] 10. Хендерсон С., Д. Хуэн, М. Роу, К. Доусон, Г. Джонсон и А. Рикинсон. 1993. Белок BHRF1, кодируемый вирусом Эпштейна-Барра, вирусный гомолог Bcl-2, защищает В-клетки человека от запрограммированной гибели клеток.Proc. Natl. Акад. Sci. США 90 : 8479-8483. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Lillehoj, H. S., E. P. Lillehoj, D. Weinstock, and K. A. Schat. 1988. Функциональные и биохимические характеристики антигенов птичьих Т-лимфоцитов, идентифицированные с помощью моноклональных антител. Евро. J. Immunol. 18 : 2059-2065. [PubMed] [Google Scholar]

12. Лю Дж. Л., Л. Ф. Ли и Х. Дж. Кунг. 1996. Биологические свойства латентного белка болезни Марека MEQ: субклеточная локализация и трансформирующий потенциал, с.271-277. В Р. Ф. Сильва, Х. Х. Ченг, П. М. Куссенс, Л. Ф. Ли и Л. Ф. Велисер (ред.), Текущие исследования болезни Марека. Американская ассоциация патологов птиц, Inc., Кеннет-Сквер, Пенсильвания,

13. Пейн, Л. Н. и П. М. Биггс. 1967. Исследования болезни Марека. II. Патогенез. J. Natl. Cancer Inst. 39 : 281-302. [PubMed] [Google Scholar] 14. Рао, Л., М. Деббас, П. Саббатини, Д. Хоккенберри, С. Корсмейер и Э. Уайт. 1992. Белки аденовируса E1A индуцировали апоптоз, который ингибируется белками E1B 19K и Bcl-2.Proc. Natl. Акад. Sci. США 89 : 7742-7746. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 15. Редди, С. М., Б. Лупиани, И. М. Гимено, Р. Ф. Сильва, Л. Ф. Ли и Р. Л. Виттер. 2002. Спасение патогенного вируса болезни Марека с перекрывающимися космидными ДНК: использование мутанта pp38 для проверки технологии исследования функции генов. Proc. Natl. Акад. Sci. США 99 : 7054-7059. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Росс, Л. Дж. Н. 1999. Трансформация Т-клеток вирусом болезни Марека.Trends Microbiol. 7 : 22-29. [PubMed] [Google Scholar] 17. Сильва, Р. Ф. и Л. Ф. Ли. 1984. Опосредованная моноклональными антителами иммунопреципитация белков из клеток, инфицированных вирусом болезни Марека и вирусом герпеса индейки. Вирусология 136 : 307-320. [PubMed] [Google Scholar] 18. Сильва, Р. Ф., Л. Ф. Ли и Г. Ф. Кутиш. 2001. Геномная структура вируса болезни Марека, с. 143-158. В К. Хираи (ред.), Актуальные темы микробиологии и иммунологии.Шпрингер-Верлаг, Берлин, Германия. [PubMed]

19. Виттер Р. Л. и К. А. Шат. 2003. Болезнь Марека, с. 407-465. В Ю. М. Саиф, Х. Дж. Барнс, А. М. Фадли, Дж. Р. Глиссон, Л. Р. Макдугалд и Д. Э. Суэйн (ред.), Болезни домашней птицы, 11-е изд. Издательство государственного университета Айовы, Эймс, Айова.

20. Се, К., А.С. Андерсон и Р.В. Морган. 1996. Гены ICP4, pp38 и meq вируса болезни Марека (MDV) участвуют в поддержании трансформации лимфобластоидных клеток, трансформированных MDCC-MSB1.J. Virol. 70 : 1125-1131. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21. Ямагути Т., С. Л. Каплан, П. С. Вакенелл и К. А. Шат. 2000. Трансактивация латентных генов герпесвируса болезни Марека в QT35, клеточной линии фибробластов перепелов, вирусом герпеса индеек. J. Virol. 74 : 10176-10186. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Болезнь Марека, герпесвирус, MDV | Окружающая среда, здоровье и безопасность

распечатайте эту страницу

ПАСПОРТ БЕЗОПАСНОСТИ МАТЕРИАЛА — ИНФЕКЦИОННЫЕ ВЕЩЕСТВА

РАЗДЕЛ I: ИНФЕКЦИОННЫЙ АГЕНТ

Название: Вирус герпеса болезни Марека (MDV), серотип 1.

Синоним или перекрестная ссылка: Галлидный герпесвирус 2.

Характеристики: Семейство herpesviridae, подсемейство alphaherpesvirinae, род Mardivirus Размер вириона с оболочкой составляет приблизительно 160 нм. Геном двухцепочечной ДНК размером примерно 180 т.п.н. Вирус реплицируется в лимфоцитах и эпителиальных клетках in vivo. Вирус или вирус, культивируемый клетками в лимфобластоидных клетках, трансформированных MDV, строго ассоциирован с клетками. Уничтожение инфицированных клеток разрушает инфекционность. ДР.ГРУППА ЩАТА.

РАЗДЕЛ II — ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ЗДОРОВЬЯ

Патогенность: Заражает кур, может заразить индюшат и японских перепелов. Инфекция вызывает разрушение лимфоцитов с последующей иммуносупрессией. При определенных условиях MDV вызывает лимфомы у кур, индеек и японских перепелов. Не заразно для человека.

Эпидемиология: MDV имеет всемирное распространение.

Ареал-хозяин: Галловые птицы (куры, индейки, японские перепела)

Инфекционная доза: Теоретически 1 единица образования налета может вызвать инфекцию у восприимчивых цыплят

Путь передачи: Бесклеточный MDV продуцируется в эпителии перьевых фолликулов (FFE), поэтому пыль и перхоть от перьев могут быть заразными.

Инкубационный период: от 3 до 4 дней для репликации вируса в лимфоидных органах, от 12 до 16 дней для распространения вируса через FFE и> 3 недель для развития опухоли у кур.

РАЗДЕЛ III — РАСПРОСТРАНЕНИЕ

Водохранилище: Цыплята

Зооноз: нет

Векторы: нет

РАЗДЕЛ IV — ЖИЗНЕННОСТЬ

Чувствительность к лекарствам: N / A

Восприимчивость к дезинфицирующим средствам: MDV, ассоциированный с клетками, чувствителен ко многим дезинфицирующим средствам. Рекомендуется 10 минут в 1% гипохлорите.

Физическая инактивация: ассоциированный с клеткой вирус: 30 минут при 56 ° C. Бесклеточный вирус: 10 минут 1% гипохлорит, 30 минут при 56 ° C.

Выживание вне хозяина: ассоциированный с клеткой вирус зависит от жизнеспособности клеток. Бесклеточный вирус из FFE, связанный с клеточным мусором: от 4 до 8 месяцев при комнатной температуре.

РАЗДЕЛ V- МЕДИЦИНСКИЙ

NA, не заразен для человека.

РАЗДЕЛ VI — ЛАБОРАТОРНЫЕ ОПАСНОСТИ

Лабораторные инфекции: лабораторных инфекций у человека не зарегистрировано.

РАЗДЕЛ VII — РЕКОМЕНДУЕМЫЕ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Требования к локализации: Вирус, ассоциированный с клетками: уровень биобезопасности 1 будет удовлетворительным, но уровень 2 будет необходим для предотвращения бактериального заражения культур клеток.

Защитная одежда: Рекомендуется лабораторный халат

Другие меры предосторожности: Нет

РАЗДЕЛ VIII — ОБРАЩЕНИЕ С ИНФОРМАЦИЕЙ

Разливы: Вирус, связанный с клетками: залить 1% гипохлоритом или 70% спиртом и очистить бумажными полотенцами.

Удаление: Вирус, связанный с клетками: добавить 1% гипохлорита в суспензию инфицированных вирусом клеток или автоклав.

Хранение: В криогенных флаконах в жидком азоте (предпочтительнее для длительного хранения) или при -80 ° C до 1 месяца.

РАЗДЕЛ IX — РАЗНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Дата подготовки: май 2005 г.

Подготовил: К.А. Щат, профессор птичьей вирусологии

Информация основана на главе «Болезнь Марека» Виттера, Р.Л. и Шата, К.А. в книге «Болезни домашней птицы» (учебник по болезням домашней птицы), 11-е издание, 2003 г.

границ | Идентификация рецептора и клеточного ортолога вируса болезни Марека (MDV) CXC Chemokine

Введение

Вирус

болезни Марека (MDV) является высокоонкогенным вирусом Alphaherpesvirus , который поражает кур и причиняет огромные экономические потери во всем мире (Davison and Nair, 2004). Он также известен как галлидный герпесвирус 2 типа (GaHV-2) и вызывает множество клинических симптомов, включая подавление иммунитета, паралич и острую смерть (Witter, 1997).Кроме того, MDV эффективно индуцирует злокачественные Т-клеточные лимфомы, которые считаются наиболее частым клинически диагностируемым раком в животном мире (Parcells et al., 2012). Заражение восприимчивых животных вирулентными штаммами MDV обычно приводит к смертности до 100% (Davison and Nair, 2004). Современные вакцины против MDV очень эффективны для минимизации коммерческих потерь, но не вызывают стерилизующего иммунитета, что позволяет продолжать эволюцию штаммов MDV в вакцинированных стадах цыплят (Davison and Nair, 2005; Osterrieder et al., 2006).

При вдыхании бесклеточного MDV из загрязненной среды вирус способен инфицировать макрофаги, дендритные клетки (ДК) и В-клетки, которые переносят вирус в лимфоидные органы, такие как селезенка, тимус и бурса Фабрициуса, где вирус может быть обнаружен в течение 24 часов после заражения. У инфицированных цыплят MDV преимущественно реплицируется в В-клетках, которые впоследствии переносят вирус в Т-клетки (Jarosinski et al., 2006). Вирус может либо продуктивно реплицироваться в Т-клетках, либо устанавливать латентный период, позволяя вирусу сохраняться в хозяине на всю жизнь (Jarosinski et al., 2006; Шермулы и др., 2015). Кроме того, MDV может трансформировать Т-клетки CD4 ⁺, приводя к смертельным лимфомам. MDV-индуцированные опухолевые клетки часто являются клональными внутри животного и имеют фенотип регуляторных Т-клеток (Treg), основанный на их профилях цитокинов и маркеров клеточной поверхности, включая CD25 и CD30 (Burgess et al., 2004; Shack et al., 2008). Кроме того, эти трансформированные клетки содержат интегрированный вирусный геном в одной или нескольких хромосомах (Kaufer et al., 2011b; Greco et al., 2014; Osterrieder et al., 2014), что обеспечивает сохранение генома вируса в этих быстро делящихся клетках. Было показано, что в процесс трансформации вовлечены несколько вирусных факторов, в том числе главный онкоген Meq (Jones et al., 1992), кодируемая вирусом теломеразная РНК vTR (Kaufer et al., 2010, 2011a), miRNA (Yao et al., al., 2009; Zhao et al., 2011) и несколько предполагаемых открытых рамок считывания неизвестной функции (Jarosinski et al., 2005; Jarosinski and Schat, 2006).

Еще одним фактором, который играет решающую роль в патогенезе MDV и образовании опухолей, является хемокин CXC vIL-8 (Parcells et al., 2001; Engel et al., 2012). Геном MDV кодирует две копии vIL-8, который первоначально был назван в честь интерлейкина 8 (cIL-8; cCXCL8), первого хемокина CXC, идентифицированного у кур (Kaiser et al., 1999; Parcells et al., 2001). vIL-8 секретируется клетками, инфицированными MDV, и необходим для установления инфекции у животных, инфицированных естественным путем. Вирусный хемокин первоначально был описан как хемоаттрактант мононуклеарных клеток периферической крови курицы (PBMC) (Parcells et al., 2001).Недавние исследования показали, что vIL-8 рекрутирует В-клетки, главную мишень для литической репликации MDV. Кроме того, vIL-8 взаимодействует с CD4 ⁺ CD25 ⁺ Т-клетками, которые, вероятно, служат мишенью для латентности и трансформации MDV (Engel et al., 2012).

Биологические свойства vIL-8 резко контрастируют с функциями его предполагаемых клеточных ортологов IL-8. IL-8 связывает и рекрутирует нейтрофилы вместо B- или T-клеток (Kaiser et al., 2005), предполагая, что IL-8 не является клеточным ортологом вирусного хемокина.С момента выхода полного генома курицы было идентифицировано восемь ортологов хемокинов CXC цыплят (Kaiser et al., 2005). Среди них три воспалительных хемокина CXCL8L1 (K60), CXCL8L2 (9E3 / CEF4) и CXCL1 (GROa), которые обладают консервативным мотивом ELR (глутаминовая кислота-лейцин-аргинин) (Li et al., 2005; Poh et al., 2008 ). Остальные пять — это гомеостатические ELR-отрицательные хемокины CXC, которые координируют перенос лейкоцитов по всему телу. К ним относятся CXCL12, CXCL14 и три родственных гена, названные CXCL13L1, L2 и L3 (Kaiser et al., 2005).

Здесь мы выполнили последовательность и филогенетический анализ для идентификации потенциальных клеточных ортологов vIL-8. Функциональные свойства vIL-8 и его ближайших родственников оценивали с помощью анализов связывания и хемотаксиса. Помимо этого, мы идентифицировали рецептор vIL-8 и его клеточные ортологи и подтвердили экспрессию рецептора на естественных клетках-мишенях vIL-8.

Материалы и методы

Последовательность и филогенетический анализ

Аминокислотные последовательности MDV vIL-8 и всех известных хемокинов куриного CXC были сопоставлены с использованием ClustalW (Vector NTI 9.1, Invitrogen) и программное обеспечение MEGA 6 (Tamura et al., 2013). Филогенетический анализ хемокинов vIL-8, куриных и человеческих CXC проводился на основе их аминокислотных последовательностей с применением методов объединения соседей (NJ), максимальной экономии (MP) и максимального правдоподобия (ML) с использованием программного обеспечения MEGA 6 (Tamura и др., 2013). Полноразмерные аминокислотные последовательности MDV vIL-8 (AAN60433.1), известных куриных хемокинов CXC, cCXCL1 (XP_420608.1), cCXCL8L1 (NP_9.1), cCXCL8L2 (NP_9.1), cCXCL12 (NP_989841.1), CXCL13L1 (XP_004941081.1), CXCL13L2 (CCC15119.1), CXCL13L3 (CCC15120.1), cCXCL14 (NP_9.1) и ортологи хемокинов CXC человека, hCXCL1 (AAh21976.1), hCXCL8 (NP_000575.1), hCXCL312 (AAh) hCXCL13 (AAh22589.1), hCXCL14 (XP_527018.2) были получены из Genbank.

Ячейки

Клетки для проточного цитометрического анализа получали от цыплят белого леггорна M11 (B ^x2x / B ^x2x). Птиц содержали в обычных условиях группами до 10 голов. Все эксперименты на животных были одобрены соответствующими государственными органами (Regierung von Oberbayern, Az.: 55.2-1-54-2532.6-12-09). Клетки HEK293 и HEK293-T выращивали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы с добавлением 10% FBS и 1% пенициллина / стрептомицина (Biochrom, Германия), клетки DT40 выращивали в IMDM (Biochrom, Германия) с 10% FBS, 1% куриной сывороткой ( ThermoFisher Scientific, США) и 1 мМ ß-меркаптоэтанола при 37 ° C. Первичные лейкоциты получали путем диссоциации органов с использованием сита из нержавеющей стали и центрифугирования плотности на Biocoll (1077 г / мл, Biochrom, Германия).

Создание рекомбинантных хемокинов

Для создания рекомбинантных белков для анализов связывания и хемотаксиса были созданы плазмиды экспрессии.Полноразмерные кодирующие последовательности MDV-vIL-8, CXCL13L1, L2 или L3 клонировали в модифицированный вектор экспрессии pCR3.1, содержащий C-концевую huFc-метку. кДНК из инфицированных RB-1B клеток или клеток селезенки курицы Rhode Island Red (RIR) служила матрицей для клонирования вирусного и клеточного генов соответственно. Клетки HEK293 трансфицировали конструкциями экспрессионных плазмид с использованием полиэтиленимина (PEI), как описано ранее (Boussif et al., 1995), или реагента для трансфекции ДНК X-tremeGENE ^® 9 (Sigma-Aldrich) в соответствии с протоколом производителя.Для получения белка для анализов хемотаксиса клетки культивировали в бессывороточной среде HEK293 A (Bio & SELL, Германия). Супернатанты, содержащие секретированные хемокины, меченные huFc, или контрольный белок huFc, собирали через 24 часа и подвергали дальнейшему анализу.

Подтверждение рекомбинантных хемокинов

Рекомбинантные хемокины и контроль huFc определяли количественно с помощью ELISA. Вкратце, 96-луночные планшеты для ELISA (MaxiSorp, Nunc, Висбаден, Германия) покрывали в течение ночи 1 мкг / мл ослиного анти-huIgG (Jackson ImmunoResearch Europe Ltd, Великобритания) в карбонатном буфере (pH 9.6) и заблокировали 4% обезжиренным молоком. Затем планшеты инкубировали с серийными разведениями супернатантов, содержащих хемокины, меченные huFC, с последующей инкубацией с кроличьими анти-huIgG, связанными с HRP (SouthernBiotech, США), 1: 4000 в PBS-T и тетраметилбензидине (TMB). Чтобы подтвердить правильный размер рекомбинантных хемокинов и контрольного белка huFc, мы выполнили SDS-PAGE и вестерн-блоттинг с использованием вторичных Ab козьих антител против Fc HRP, конъюгированных с человеческим Fc (Invitrogen).

Получение клеток, экспрессирующих CXCR5, и моноклонального антитела против CXCR5

Для создания клеточных линий, экспрессирующих CXCR5 с N-концевой внеклеточной Flag-меткой, мы амплифицировали полноразмерный рецептор из кДНК бурсальных клеток и клонировали его в вектор экспрессии p3XFLAG-myc-CMV ™ -25 (Sigma, США).Плазмиду экспрессии CXCR5 трансфицировали в клетки HEK293 с использованием реагента для трансфекции ДНК X-tremeGENE ^® 9 (Sigma-Aldrich) в соответствии с протоколом производителя, и стабильные клоны отбирали с 250 мкг / мл неомицина (Biochrom, Германия). Экспрессию рецептора подтверждали проточной цитометрией с использованием мышиных антител против Flag, конъюгированных с Alexa647 (AbD Serotec, Германия).

клеток HEK293, экспрессирующих CXCR5, использовали для повторных внутрибрюшинных иммунизаций мышей BALB / c.Клетки селезенки мыши были слиты с клетками гибридомы SP2 / 0-Ag14. Специфичность полученных гибридом исследовали с помощью проточной цитометрии с использованием неразбавленного супернатанта гибридомы и козьего антимышиного IgG-FITC (Sigma-Aldrich, США, 1: 200) на первичных клетках селезенки, а также на клетках HEK293-CXCR5 и нетрансфицированном HEK293. Был выбран клон 6A9, его изотип был определен как IgG1, и моноклональность была обеспечена субклонированием с использованием метода ограниченного разведения одной клетки.

Анализы связывания

Связывание рекомбинантных хемокинов с рецептором

исследовали с помощью проточной цитометрии на клетках линии В-клеток курицы DT40, клетках HEK293-CXCR5 и первичных куриных лейкоцитах из различных лимфоидных органов.Клетки инкубировали на льду с супернатантами, содержащими хемокин, в течение 30 мин. Связывание хемокинов детектировали с использованием вторичного антитела мыши против huFC-Alexa647. Субпопуляции первичных лейкоцитов оценивали путем окрашивания конъюгированным с RPE анти-Bu1 (клон AV20, В-клетки), анти-CD4 (CT4), анти-CD8 (CT8) и анти-Kul01 (миелоидные клетки) (Southern Biotechnology, США).

Миграционные тесты

Анализы миграции проводили при комнатной температуре с одноразовым материалом, не содержащим эндотоксинов.Клетки DT40 дважды промывали теплым RPMI (Biochrom, Германия) и высевали при концентрации 10 ⁵ клеток / мл в хемотаксисную среду (RPMI, содержащая 0,5% бычьего сывороточного альбумина). Проницаемые носители Transwell ^® на 24 лунки (Corning, Нью-Йорк, США) с размером пор 5 мкм были покрыты бычьим фибронектином (10 мкг / мл) (Life Technologies), растворенным в дистиллированном H _{, не содержащем эндотоксинов. 2} O (Sigma-Aldrich) и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C и 5% CO ₂. Планшеты сушили на воздухе при 37 ° C в течение 2 часов.На дно вставок трансвелл добавляли различные разведения бессывороточного супернатанта от трансфицированных хемокинами клеток HEK293-T. Среда для хемотаксиса служила контролем. Во вставки трансвелл добавляли 100 мкл суспензии клеток DT40. После времени миграции 90 мин клетки отбирали из нижней камеры и переносили непосредственно в пробирки FACS Trucount ^® (Becton Dickinson) и количество клеток определяли с помощью проточной цитометрии. Индекс хемокинеза рассчитывали путем деления количества мигрировавших клеток в стимулированных лунках на контроль хемокинеза.

Проточная цитометрия

Проточный цитометрический анализ выполняли с помощью BD FACSCanto II (Becton Dickinson, Heidelberg, Германия) с использованием программного обеспечения DIVA и FlowJo (Tree Star Inc., Орегон, США). Графики регистрировали для жизнеспособных клеток при различении дублетов.

Статистика

Статистический анализ был выполнен с использованием GraphPad Prism. Данные анализов связывания анализировали с использованием парного теста Стьюдента t и анализа миграции с помощью одностороннего дисперсионного анализа. Результаты считались значимыми, когда p <0.05.

Результаты

Последовательность и филогенетический анализ MDV vIL-8

Чтобы идентифицировать потенциальные клеточные ортологи вирусного хемокина, мы проанализировали аминокислотные последовательности всех хемокинов CXC курицы, присутствующих в недавно опубликованном геноме курицы (рис. 1A). Удивительно, но vIL-8 имел самую высокую гомологию с вариантами CXCL13, а не с двумя хемокинами куриного IL8, CXCL8L1 (K60) и CXCL8L2 (9E3 / CEF4), в честь которых он был первоначально назван. CXCL13L1 имеет наивысшую идентичность последовательности, равную 53.8% с vIL-8, что позволяет предположить, что этот вариант является истинным ортологом вирусного хемокина. CXCL13L2 (33,0%) и CXCL13L3 (36,1%) также имели более высокую идентичность последовательности с vIL-8 по сравнению с вариантами IL-8 CXCL8L1 (28,8%) и CXCL8L2 (31,1%). Важно отметить, что vIL-8 и все три варианта CXCL13 лишены консервативного мотива ELR, присутствующего в привлекающих гранулоциты воспалительных хемокинах, таких как IL-8. Кроме того, vIL-8, CXCL13L1 и CXCL1L2 — единственные гены с тремя экзонами, тогда как все другие хемокины куриного CXC имеют четыре экзона (Wang et al., 2005). Кроме того, мы провели филогенетический анализ vIL-8 и клеточных хемокинов CXC (рис. 1B), в которых vIL-8 объединялся с вариантами CXCL13 человека и курицы, а не с воспалительными хемокинами IL-8, что снова указывает на то, что vIL-8 является ортолог CXCL13.

Рисунок 1 . Последовательность и филогенетический анализ. (A) Выравнивание аминокислотной последовательности хемокинов vIL-8 и куриного CXC проводили с использованием Clustal W. CXC и мотив ELR обозначены звездочками и прямоугольником соответственно.Консервированные остатки цистеина и пролина выделены черным цветом. Консервативные аминокислотные остатки с vIL-8 показаны темно-серым цветом, а аналогичные остатки — светло-серым. Промежутки совмещения обозначены тире. (B) Филогенетическое дерево vIL-8, куриных (c) и родственных человеческих (h) хемокинов CXC. Показаны ELR-положительные воспалительные хемокины CXC человека и курицы.

vIL-8 является функциональным ортологом CXCL13L1

Чтобы подтвердить анализ in silico , мы сравнили биологические свойства vIL-8 и вариантов куриного CXCL13.Чтобы получить функциональные хемокины, мы клонировали huFC-меченые варианты vIL-8 и CXCL13 в экспрессионные плазмиды и продуцировали рекомбинантные белки в клетках HEK293. Рекомбинантный белок в супернатантах культур количественно определяли с помощью ELISA (фиг. 2A). Вестерн-блоттинг подтвердил правильный размер мономерной формы CXCL13L1, L2 и L3 примерно 38 кДа (рис. 2В). Для CXCL13L1 наблюдалась дополнительная полоса с более низкой молекулярной массой, которая, скорее всего, представляет собой продукт разложения хемокина.Как наблюдалось ранее, размер huFC и vIL-8 был больше, чем предполагалось (Engel et al., 2012), что, вероятно, связано с гликозилированием белков.

Рисунок 2 . Экспрессия рекомбинантных белков CXCL13. (A) Количественная оценка указанных рекомбинантных хемокинов и контрольного белка huFc с помощью ELISA. BCMA-Fc и среду из ложно трансфицированных клеток использовали в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно. (B) Вестерн-блоттинг указанных рекомбинантных хемокинов и контрольного белка huFc.

Ранее мы продемонстрировали, что vIL-8 связывается и индуцирует хемотаксис В-клеток (Engel et al., 2012). Поэтому мы оценили связывание рекомбинантных хемокинов с линией В-клеток курицы DT40. vIL-8 и все три варианта CXCL13 эффективно связывались с В-клетками курицы (фиг. 3A, B), в то время как связывание с контрольным белком не наблюдалось. Интересно, что vIL-8 показал явно более высокий MFI, чем варианты CXCL13.

Рисунок 3 . Функциональный анализ вариантов vIL-8 и CXCL13. (A) Связывание указанных хемокинов с клетками DT40 оценивали с помощью FACS. Показан один репрезентативный эксперимент из трех независимых экспериментов. (B) Количественная оценка связывания хемокинов с клетками DT40 показана в (A) . Показано среднее ± стандартное отклонение средней интенсивности флуоресценции (MFI) трех независимых экспериментов. (C) Рекрутирование клеток DT40 оценивали с помощью анализов хемотаксиса. Миграцию В-клеток оценивали при трех различных разведениях, как указано.Показаны средние значения ± стандартное отклонение четырех повторов из двух независимых экспериментов.

Чтобы определить, вызывают ли vIL-8 и варианты CXCL13 миграцию В-клеток, мы выполнили анализы хемотаксиса с использованием клеток DT40. vIL-8 и варианты CXCL13 эффективно индуцировали хемотаксис (рис. 3C), что позволяет предположить, что эти хемокины имеют сходные биологические функции.

Чтобы подтвердить, что vIL-8 и варианты CXCL13 также нацелены на одни и те же типы клеток in vivo , мы выполнили анализы связывания с первичными PBMC.vIL-8, CXCL13L1 и CXCL13L2 связывались с Bu1-положительными В-клетками (фиг. 4A), что указывает на то, что эти хемокины также нацелены на те же клетки in vivo . Как и в случае с клетками DT40, наиболее сильное связывание наблюдалось для vIL-8. Удивительно, но CXCL13L3 не связывает первичные В-клетки. В дополнение к В-клеткам, vIL-8, как было ранее показано, также связывает определенную субпопуляцию CD4 ⁺ Т-клеток (Engel et al., 2012). Поэтому мы оценили связывание vIL-8 и вариантов CXCL13 с CD4 ⁺ Т-клетками в первичных PBMC.vIL-8, CXCL13L1 и CXCL13L2 связывались с субпопуляцией CD4 ⁺ Т-клеток. Как наблюдалось для В-клеток, vIL-8 связывал эти клетки более эффективно, чем клеточные хемокины, в то время как для CXCL13L3 наблюдалось только минимальное связывание (фиг. 4B). Взятые вместе, наши данные демонстрируют, что vIL-8 обладает свойствами связывания и хемотаксиса, сравнимыми с CXCL13L1 и CXCL13L2, что дополнительно подтверждает наши данные in silico о том, что вирусный хемокин является ортологом CXCL13.

Рисунок 4 .Взаимодействие вариантов vIL-8 и CXCL13 с первичными лимфоцитами. Связывание указанных хемокинов с (A), B и (B), Т-хелперами в первичных PBMC. Клетки окрашивали анти-Bu1 или анти-CD4 и указанными хемокинами, и графики вводили для лейкоцитов. Данные представляют собой один из двух независимых экспериментов.

CXCR5 является рецептором как vIL-8, так и CXCL13

Далее мы приступили к определению рецептора vIL-8 и его клеточных ортологов. У людей и мышей CXCL13 имеет только один рецептор CXCR5.Следовательно, мы исследовали, связываются ли ортологи куриного CXCL13 с недавно обнаруженным куриным CXCR5 (DeVries et al., 2006). Поэтому мы создали клетки HEK293, которые экспрессируют рецептор с N-концевой Flag-меткой, и использовали эти клетки для получения моноклонального антитела против куриного CXCR5, которое окрашивает HEK293-CXCR5, а также в качестве положительного контроля анти-Flag (рис. 5A). Для оценки связывания вариантов vIL-8 и CXCL13 клетки, экспрессирующие CXCR5, смешивали с родительскими клетками в соотношении 1: 2 в качестве внутреннего контроля для специфичности связывания.Как антитело против CXCR5, vIL-8 эффективно связывает клетки, экспрессирующие CXCR5, но не контрольные клетки (фиг. 5B), демонстрируя, что CXCR5 является рецептором вирусного хемокина. Сходным образом все три варианта CXCL13 взаимодействовали с CXCR5, подчеркивая, что эта пара рецептор-лиганд сохраняется от млекопитающих к цыплятам.

Рисунок 5 . CXCR5 является рецептором для вариантов vIL-8 и CXCL13. (A) Специфичность вновь созданного мышиного антитела против cCXR5 (клон 6A9) оценивали с помощью FACS на экспрессирующих Flag-CXCR5 и контрольных клетках HEK293. (B) Связывание указанных хемокинов со смесью CXCR5, экспрессирующей HEK293, и нетрансфицированных родительских клеток (соотношение 1: 2). Белок huFc и антитело, специфичное к CXCR5, использовали в качестве отрицательного и положительного контроля соответственно. (C) Обнаружение рецептора CXCR5 на клетках-мишенях вариантов vIL-8 и CXCL13. Первичные PBMC окрашивали на B (Bu-1) или Т-хелперные клетки (CD4) и специфическое антитело к CXCR5.

Затем мы оценили, экспрессируется ли CXCR5 на естественных клетках-мишенях MDV in vivo .Мы изолировали первичные клетки из крови и различных лимфоидных тканей и детектировали экспрессию CXCR5 с помощью нашего антитела к CXCR5. CXCR5 эффективно экспрессировался на В-клетках и подмножестве клеток CD4 ⁺, как показано для vIL-8 (фиг. 5C). Кроме того, мы оценили экспрессию CXCR5 в клетках, выделенных из крови (рисунок S1A), селезенки (рисунок S1B), сумки Фабрициуса (рисунок S1C) и тимуса (рисунок S1D). CXCR5 был обнаружен на всех зрелых В-клетках селезенки и на всех незрелых В-клетках бурсы Фабрициуса.В крови наблюдали очень мало CXCR5-положительных Т-клеток, в то время как около 10% CD4- и CD8-положительных клеток селезенки действительно экспрессируют CXCR5. Среди тимических Т-клеток экспрессия CXCR5 ограничена небольшими субпопуляциями CD4 и CD8 одиночных положительных клеток. Интересно, что все моноциты KUL01 ⁺ в крови и большинство макрофагов KUL01 ⁺ в селезенке также экспрессируют CXCR5, что позволяет предположить, что vIL-8 также может рекрутировать эти клетки для инфекции MDV. Взятые вместе, наши данные демонстрируют, что CXCR5 является рецептором vIL-8 и CXCL13 и экспрессируется В-клетками, субпопуляциями CD4 + Т-клеток и моноцитами / макрофагами.

Обсуждение

Вирусы герпеса эволюционировали вместе со своим хозяином в течение миллионов лет. В течение этого времени многие герпесвирусы приобрели белки клетки-хозяина, которые помогают в жизненном цикле вируса, опосредуя иммунное уклонение, пролиферацию клеток или контроль апоптоза (Hol Switzerlandt et al., 2002). Кроме того, несколько геномов герпесвирусов кодируют вирусные хемокины, которые могут индуцировать или ингибировать хемотаксис (Epperson et al., 2012; Cornaby et al., 2016). MDV приобрел хемокин CXC, который был назван vIL-8 из-за его сходства с IL-8 (9E3 / CEF4), первым хемокином CXC, идентифицированным у кур (Kaiser et al., 1999; Parcells et al., 2001). С тех пор в полном геноме курицы было обнаружено несколько других хемокинов CXC курицы (International Chicken Genome Sequencing Consortium, 2004). Исследование биологических функций vIL-8 показало, что хемокин вируса связывает и привлекает другие клетки-мишени, чем IL-8. Поэтому мы решили идентифицировать клеточный ортолог vIL-8 и сравнить их биологические свойства. Анализ In silico предоставил первое доказательство того, что vIL-8 является ортологом CXCL13, а не воспалительными хемокинами куриного IL-8.Отсутствие мотива ELR и структуры экзона также указывает на то, что vIL-8 произошел от одного из вариантов CXCL13, наиболее вероятно, CXCL13L1 и CXCL13L2. Хотя CXCL13L1 обладал наибольшим сходством последовательностей с vIL-8, два других варианта CXCL13 также обладают сходными биологическими свойствами. Связывание и индукция хемотаксиса В-клеток (DT40) были сопоставимы между vIL-8 и вариантами CXCL13. Мы использовали первичные B- и T-клетки в PBMC, чтобы подтвердить, что связывание также происходит с клетками ex vivo .В то время как CXCL13L1 и CXCL13L2 связывали В- и Т-клетки способом, сравнимым с vIL-8, CXCL13L3 не обнаруживал связывания или обнаруживал только минимальное связывание. Одной из возможных причин пониженного связывания варианта L3 является более низкая стабильность хемокина. Это также может объяснить стабильно более низкий выход CXCL13L3 по сравнению с другими хемокинами, обнаруженный с помощью ELISA. С другой стороны, количество CXCR5, экспрессируемого на клетках 293, по сравнению с В- и Т-клетками, может способствовать этому явлению. Интересно, что как в анализах связывания, так и в исследованиях миграции, эффективность vIL-8, по-видимому, превышала клеточные ортологи.Возможно, вирусный хемокин развил еще более высокую аффинность по сравнению с его клеточными ортологами, чтобы преимущественно привлекать клетки-мишени MDV.

В геноме человека и мышей присутствует только один хемокин CXCL13, который связывается с рецептором CXCR5 (Cyster et al., 2000). CXCR5 в основном экспрессируется на В-клетках, Т-хелперных клетках и фолликулярных хелперных Т-клетках. Взаимодействие между гомеостатическим хемокином и его единственным рецептором является центральным для направления В-клеток к фолликулам В-клеток и участвует в зонировании зародышевых центров (Russo et al., 2014). Он также привлекает хелперные Т-клетки к участкам В-клеток и опосредует взаимодействие между В- и Т-клетками.

У кур оставалось неизвестным, связывают ли три варианта CXCL13 также предполагаемый ортолог рецептора CXCR5. Таким образом, мы создали моноклональное антитело против CXCR5, направили его экспрессию на куриные лимфоциты и смогли продемонстрировать, что все В-клетки и субпопуляции Т-клеток имеют рецептор на своей поверхности. Интересно, что эти подмножества также являются мишенями для vIL-8 и вариантов CXCL13.Поскольку vIL-8 и все варианты CXCL13 эффективно связывались с экспрессирующими CXCR5 клетками, но не с контрольными клетками, мы могли подтвердить, что куриный CXCR5 является рецептором для этих хемокинов. Недавно было показано, что макрофаги также являются потенциальной мишенью для инфекции MDV (Chakraborty et al., 2017). Секреция vIL-8 может способствовать привлечению экспрессирующих CXCR5 моноцитов и макрофагов к месту инфекции, которые могут транспортировать вирус к лимфоидным органам, где инфицированы В- и Т-клетки.

В совокупности мы проанализировали vIL-8 и все аннотированные хемокины куриного CXC и идентифицировали ближайшие клеточные ортологи.Наши данные демонстрируют, что vIL-8 имеет биологические функции, сравнимые с вариантами CXCL13, и наиболее тесно связан с CXCL13L1. Кроме того, мы идентифицировали куриный CXCR5 как клеточный рецептор этого вирусного хемокина и его клеточных ортологов. Таким образом, наши данные предоставляют первое функциональное свидетельство того, что пара хемокин-рецептор CXCL13-CXCR5 также сохраняется у млекопитающих и птиц. В целом, наши данные не только проливают свет на происхождение вирусного хемокина, но также предоставляют важную информацию о механизме, который позволяет vIL-8 вносить вклад в патогенез MDV.

Авторские взносы

SH, IA, VW, PK и BK разработали исследование. SH, IA и FB проводили эксперименты. SH, IA, FB и BK проанализировали данные. Ш., И.А. и Б.К. написали рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарны Марине Кон и Анн Реум за их отличную техническую помощь.Это исследование было поддержано проектом BMBF FugatoPlus AvImmun, предоставленным SH, грантом DFG KA 3492 / 3-1 и стартовым грантом ERC Stg 677673, предоставленным BK.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2017.02543/full#supplementary-material

Рисунок S1 . Лейкоциты выделяли из крови (A) , селезенки (B) и бурсы Fabricius (C) , окрашивали антителом против CXCR5 и маркерами для различных популяций клеток для анализа проточной цитометрии. (D) Клетки вилочковой железы были подвергнуты тройному окрашиванию анти-CD4, анти-CD8 и анти-CXCR5 и CD8, одноположительным (Q1), CD4 / CD8 двойным положительным (Q2), одиночным положительным CD4 (Q3). и дважды отрицательные (Q4) клетки были заблокированы для экспрессии CXCR5.

Сокращения

MDV, вирус болезни Марека; ИЛ-8, интерлейкин 8; PBMC, мононуклеарные клетки периферической крови.

Список литературы

Буссиф, О., Лезуальч, Ф., Занта, М. А., Мергни, М. Д., Шерман, Д., Demeneix, B., et al. (1995). Универсальный вектор для переноса генов и олигонуклеотидов в клетки в культуре и in vivo, : полиэтиленимин. Proc. Natl. Акад. Sci. США 92, 7297–7301. DOI: 10.1073 / pnas.92.16.7297

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Берджесс, С. К., Янг, Дж. Р., Баатен, Б. Дж., Хант, Л., Росс, Л. Н., Парселлс, М. С. и др. (2004). Болезнь Марека — естественная модель лимфом, сверхэкспрессирующая антиген болезни Ходжкина (CD30). Proc. Natl. Акад. Sci. США . 101, 13879–13884. DOI: 10.1073 / pnas.0305789101

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чакраборти, П., Вервельде, Л., Дальзил, Р. Г., Уоссон, П. С., Наир, В., Дутия, Б. М. и др. (2017). Инфекция фагоцитов вирусом болезни Марека: модель инфекции de novo in vitro . J. Gen. Virol . 98, 1080–1088. DOI: 10.1099 / jgv.0.000763

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Корнаби, К., Таннер, А., Штутц, Э. В., Пул, Б. Д., и Бергес, Б. К. (2016). Пиратство на молекулярном уровне: вирусы герпеса человека манипулируют хемотаксисом клеток. Дж. Дженерал Вирол . 97, 543–560. DOI: 10.1099 / jgv.0.000370

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цистер, Дж. Г., Ансель, К. М., Рейф, К., Экланд, Э. Х., Хайман, П. Л., Тан, Х. Л. и др. (2000). Фолликулярные стромальные клетки и лимфоциты, возвращающиеся к фолликулам. Immunol. Ред. . 176, 181–193.DOI: 10.1034 / j.1600-065X.2000.00618.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэвисон, Ф., и Наир, В. (2005). Использование вакцин против болезни Марека: могут ли они повысить вирулентность вируса? Expert Rev. Vaccines 4, 77–88. DOI: 10.1586 / 14760584.4.1.77

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэвисон, Т. Ф., и Наир, В. (2004). Болезнь Марека: развивающаяся проблема 906 14. Лондон: Эльзевир.

Google Scholar

ДеВриз, М. Э., Кельвин, А. А., Сюй, Л., Ран, Л., Робинсон, Дж., И Кельвин, Д. Дж. (2006). Определение происхождения и эволюции хемокиновой / хемокиновой рецепторной системы. Дж. Иммунол . 176, 401–415. DOI: 10.4049 / jimmunol.176.1.401